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[1]刘品一,吕赛群,崔磊,等.腺病毒介导的T细胞高效基因表达系统的构建[J].浙江理工大学学报,2015,33-34(自科5):718-723.
　LIU Pin yi,L Sai qun,CUI Lei,et al.Construction of AdenovirusMediated Gene Expression SystemSuit to T Cells[J].Journal of Zhejiang Sci-Tech University,2015,33-34(自科5):718-723.
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腺病毒介导的T细胞高效基因表达系统的构建()
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浙江理工大学学报[ISSN:1673-3851/CN:33-1338/TS]

卷:
第33-34卷
期数:
2015年自科5期
页码:
718-723
栏目:
出版日期:
2015-09-10

文章信息/Info

Title:
Construction of AdenovirusMediated Gene Expression SystemSuit to T Cells
文章编号:
1673-3851 (2015) 05-0718-06
作者:
刘品一;  吕赛群;  崔磊;  李振海;  黎江;  李林芳;  吴红平  金华君;  钱其军
1. 浙江理工大学生命科学学院, 杭州 310018; 2. 第二军医大学东方肝胆外科医院, 上海 200438
Author(s):
LIU Pinyi;  L Saiqun;  CUI Lei;  LI Zhenghai;  LI Jiang;  LI Linfang;  WU Hongping; JIN Huajun;  QIAN Qijun
1. School of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China;2. Eastern Hepatobiliary Surgical Hospital, the Second Military Medical University, Shanghai 200438, China
关键词:
腺病毒;  启动子;  PD;  癌症免疫治疗
分类号:
Q789
文献标志码:
A
摘要:
结合转基因修饰的手段,能有效提高细胞免疫治疗的疗效,但由于缺乏T细胞高活性表达系统,限制了该方法的应用。构建腺病毒介导的双荧光素酶启动子活性筛选系统,检测一系列常用强启动子(CMV、CMV(in)、CAG、EF1α及CASI)在T细胞株K562及Jurkat中的活性,发现EF1α启动子活性在T细胞株中的活性最高。在EF1α的基础上,增加mCMV增强子和hCMV增强子顺式作用元件,构成了2个新型嵌合型启动子CCEF及CCEF(in)。双荧光素酶检测系统检测结果表明,新构建的2个启动子在T细胞中的活性高于EF1α,且两者相比CCEF启动子活性更高( p <0.05)。利用CCEF启动子控制PD 1全长抗体基因,并将此表达框插入腺病毒基因组,构建重组腺病毒Ad CCEF anti PD 1。通过Western blotting及ELISA方法检测病毒感染T细胞株后,抗体基因的表达效率。结果表明,Ad CCEF anti PD 1感染T细胞后,PD 1抗体能在T细胞中正确表达,且表达量较高(K562中11.019 μg/mL,Jurkat中9.078 μg/mL),表明该腺病毒介导的T细胞高效的基因表达系统成功构建,具有良好的应用前景。

参考文献/References:

［1］ Mellman I, Coukos G, Dranoff G. Cancer immunotherapy comes of age［J］. Nature, 2011; 480(7378): 480-489.
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［10］ Powles T, Eder J P, Fine G D, et al. MPDL3280A (anti PD L1) treatment leads to clinical activity in metastatic bladder cancer［J］. Nature, 2014, 515(7528): 558-562.

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备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期： 2014-12-05
基金项目： 国家自然科学基金项目(81071850);重大传染病的防治重大专项(2013zx10002-010-007)
作者简介： 刘品一(1990-),女,浙江嵊州人,硕士研究生,主要从事靶向基因—病毒治疗方面的研究
通信作者： 钱其军,E-mail:qianqj@sino gene.com
更新日期/Last Update: 2015-09-14