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[1]张玉,洪叶挺,盛清,等.家蚕Argonaute2的表达分析及其结合RNA的初步研究[J].浙江理工大学学报,2014,31-32(自科6):702-709.
　ZHANG Yu,HONG Ye ting,SHENG Qing,et al.Preliminary Study on Expression Analysis of SilkwormArgonaute2 and Its Binding RNA[J].Journal of Zhejiang Sci-Tech University,2014,31-32(自科6):702-709.
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家蚕Argonaute2的表达分析及其结合RNA的初步研究()
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浙江理工大学学报[ISSN:1673-3851/CN:33-1338/TS]

卷:
第31-32卷
期数:
2014年自科6期
页码:
702-709
栏目:
(自科)生物与生命科学
出版日期:
2014-11-10

文章信息/Info

Title:
Preliminary Study on Expression Analysis of SilkwormArgonaute2 and Its Binding RNA
文章编号:
1673-3851 (2014) 06-0702-08
作者:
张玉;  洪叶挺;  盛清;  陈健;  于威;  王丹; 吴祥甫;  张耀洲;  聂作明
1. 浙江理工大学, a. 生命科学学院; b. 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室, 杭州 310018
Author(s):
ZHANG Yu ;  HONG Yeting;  SHENG Qing;  CHEN Jian;  YU Wei; WANG Dan;  WU Xiangfu;  ZHANG Yaozhou;  NIE Zuoming
a. School of Life Science, b. Zhejiang Provincial Key Laboratory of Silkworm Bioreactorand Biomedicine, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China
关键词:
BmAGO2;  表达谱分析;  结合RNA;  免疫共沉淀;  miRNA靶基因
分类号:
Q71
文献标志码:
A
摘要:
从家蚕cDNA文库中扩增到家蚕 BmAGO2 基因完整的ORF序列,通过Lasergene软件分析获得BmAGO2的抗原表位区(命名为 Kago2 ),构建含Kago2的表达载体,转化大肠杆菌诱导表达,融合蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blotting检测抗血清的效价可达到1∶25-600以上,抗体特异性较好。表达谱分析结果显示,BmAGO2蛋白在家蚕卵期、蛹期、蛾期和五龄幼虫期均表达,但在蛹期表达量要偏低。而在五龄幼虫各组织中BmAGO2蛋白的表达差异较明显,BmAGO2蛋白在头部和表皮中大量表达,丝腺、马氏管和脂肪中也有少量表达,而在血淋巴、气管和中肠中未检测到该蛋白的表达。结合BmAGO2表达谱分析结果,进一步利用其抗体通过免疫共沉淀方法从BmAGO2蛋白表达量高的家蚕头部和表皮中分离出BmAGO2蛋白及结合的RNA,并逆转录成cDNA。以家蚕miRNA潜在的靶基因Bmem4, Bm(spl)like, Bmemc, Bmmγ, Bmmβ2作为检测基因,荧光定量PCR分析获得的BmAGO2结合RNA,和对照组RNA相比,Bmem4, Bm(spl) like, Bmemc, Bmmγ, Bmβ2 基因在BmAGO2结合RNA中的含量分别富集了3.93、1.31、2.4、1.31、0.97倍。miRNA 靶位点分析表明, Bmem4和Bmemc 存在多个miRNA结合位点,极有可能是miRNA的靶基因。目前还没有有效的家蚕miRNA靶基因高通量鉴定方法,本实验为家蚕miRNA靶基因的高通量筛选提提供了可靠地实验途径。

参考文献/References:

［1］ Bartel B, Bartel D P. MicroRNAs: at the root of plant development?［J］. Plant Physiol, 2003, 132(2): 709-717.
［2］ 杨燕萍, 郭素霞, 陈晶, 等. 编码日本血吸虫 Argonaute 蛋白全长 cDNA 克隆, 表达及初步鉴定［J］. 中国人兽共患病学报, 2010(9): 830-834.
［3］ H ck J, Meister G. The Argonaute protein family［J］. Genome Biol, 2008, 9(2): 210.
［4］ Meister G, Tuschl T. Mechanisms of gene silencing by double stranded RNA［J］. Nature, 2004, 431(7006): 343-349.
［5］ Filipowicz W, Jaskiewicz L, Kolb F A, et al. Posttranscriptional gene silencing by siRNAs and miRNAs［J］. Current Opinion in Structural Biology, 2005, 15(3): 331-341.
［6］ Kandeel M, Kitade Y. Computational analysis of siRNA recognition by the Ago2 PAZ domain and identification of the determinants of RNAinduced gene silencing［J］. PLoS One, 2013, 8(2): e57140.
［7］ Nagata Y, Lee J M, Mon H, et al. RNAi suppression of beta N acetylglucosaminidase (BmFDL) for complextype Nlinked glycan synthesis in cultured silkworm cells［J］. Biotechnol Lett, 2013, 35(7): 1009-1016.
［8］ Hendrickson D G, Hogan D J, Herschlag D, et al. Systematic identification of mRNAs recruited to argonaute 2 by specific microRNAs and corresponding changes in transcript abundance［J］. PLoS One, 2008, 3(5): e2126.
［9］ Shukla G C, Singh J, Barik S. MicroRNAs: processing, maturation, target recognition and regulatory functions［J］. Mol Cell Pharmacol, 2011, 3(3): 83-92.
［10］ 李海芳, 浦永, 汤石明, 等. 人Argonaute2蛋白多克隆抗体制备及初步应用［J］. 中国免疫学杂志, 2010, 26(003): 241-244.
［11］ Wang W X, Wilfred B R, Hu Y, et al. Anti Argonaute RIP Chip shows that miRNA transfections alter global patterns of mRNA recruitment to microribonucleoprotein complexes［J］. RNA, 2010, 16(2): 394-404.
［12］ Beitzinger M, Peters L, Zhu J Y, et al. Identification of human microRNA targets from isolated argonaute protein complexes［J］. RNA Biology, 2007, 4(2): 76.
［13］ Easow G, Teleman A A, Cohen S M. Isolation of microRNA targets by miRNP immunopurification［J］. Rna, 2007, 13(8): 1198-1204.
［14］ Karginov F V, Conaco C, Xuan Z, et al. A biochemical approach to identifying microRNA targets［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2007, 104(49): 19291-19296.
［15］ Landthaler M, Gaidatzis D, Rothballer A, et al. Molecular characterization of human Argonautecontaining ribonucleoprotein complexes and their bound target mRNAs［J］. RNA, 2008, 14(12): 2580-2596.

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期： 2014-02-21
基金项目： 国家高技术研究发展计划项目(2011AA100603);浙江省自然科学基金项目(LY12C06003)
作者简介： 张玉(1990-),女,山西临汾人,硕士研究生,研究方向为家蚕功能基因组学
通信作者： 聂作明,Email:wuxinzm@126.com
更新日期/Last Update: 2014-11-19